Содержание
Перекрестный метод определения группы крови предусматривает выявление наличия/отсутствия антигенов А и В изогемагглютинирующими сыворотками и одновременно выявление антител α и β при помощи стандартных эритроцитов. Этот вариант исследования чаще всего используют в серологических лабораториях.
Что необходимо для исследования
Для типирования крови пациента, что необходимо перед хирургическим вмешательством, переливанием и в ряде других случаев, потребуются стандартные сыворотки и эритроциты, а также:
- физраствор 0,9%
- пластмассовые или стеклянные палочки отдельно для каждой ячейки;
- пластинки.
Используют сыворотки групп 0, А, В, АВ, а также стандартные эритроциты соответственно 0, А и В. Требования к проведению исследования: хорошее освещение, температура в комнате в пределах 15–25 °C. 5–10 % взвесь эритроцитов может быть получена от 2–3 людей с одной группой крови. Также должны быть соблюдены условия хранения реагентов – температура не выше + 4 °C.
Алгоритм перекрёстного исследования
Подготовка венозной крови пациента (в объёме 3–5 мл) для исследования заключается в её центрифугировании, после чего её оставляют минимум на 2 часа для получения сыворотки. Затем:
- Стандартные эритроциты для определения групп крови в растворе натрия хлорида 0,9% отмыть однократно.
- Подготовить планшет. Промаркировать каждую лунку соответствующими группами крови 0(I), A(II), B(III), указать данные пациента, кровь которого взята на исследование.
- Одну большую каплю стандартной сыворотки объемом около 0,1 мл наносят в лунку планшета. Нанесение дублируют – каждый реагент соответствующей группы наносят дважды в отдельную лунку.
- В выемки с соответствующим обозначением нанести капли объёмом 0,03 мл 0, А, В стандартных эритроцитов.
- С использованием стеклянных палочек осторожно перемешать эритроциты и сыворотку.
- Минимум 3 минуты аккуратно покачивать планшет, после чего оценить реакцию агглютинации.
Уже на первой минуте после соединения двух капель реагентов с кровью наступает агглютинация, но стандартно рекомендуется оценка результата через 3–5 минут.
Трактовка результатов
Принципиально невозможна специфическая агглютинация с любыми сыворотками в эритроцитах, принадлежащих группе 0(I) – в них отсутствуют антигены, которые могли бы вступать в соответствующую реакцию. Поэтому такие стандартные эритроциты при оценке результатов считаются контрольными. Достоверным считается тот результат, когда совпадает наличие агглютинации в лунке со стандартными эритроцитами и изогемагглютинирующими сыворотками.
Расшифровка:
- если в сыворотках реакция отсутствует, но наблюдается в эритроцитах II и III, это соответствует первой группе крови;
- агглютинация в сыворотках I и III и в эритроцитах III – вторая группа;
- наличие реакции в сыворотках I и II и эритроцитах II – третья;
- агглютинация в трех лунках с сыворотками I, II и III и её отсутствие во всех образцах с эритроцитами – четвертая.
Достоверными считаются те результаты, при оценке которых совпадают реакции в лунках с эритроцитами и сыворотками. При любых неточностях необходимо переделать исследование с применением тех же реагентов.
Ошибочная реакция может возникнуть при несоблюдении правил исследования, например, использовании мокрых палочек, смешивании контрольных образцов при слишком сильном покачивании тарелки, неправильном порядке распределения реактивов. Также к этому может привести применение загрязнённых или просроченных стандартных эритроцитов.
